摘要手持式拉曼光譜儀能夠穿透透明和不透明的包裝容器來鑒別原輔料。本應用簡報展示了使用基于空間位移拉曼光譜 (SORS) 的手持式 Agilent Vaya 拉曼光譜原輔料鑒定驗證系統(tǒng)，穿透透明玻璃和白色不透明聚乙烯容器對 mRNA 脂質(zhì)納米顆粒 (LNP) 組分進行化學身份驗證和測試。
 

　　前言脂質(zhì)納米顆粒 (LNPs) 對于各種治療藥物至關重要[1]。它們被用作藥物遞送系統(tǒng)，可實現(xiàn)有效的靶向有效載荷遞送。最近，它們已被用作  疫苗的 mRNA 載體。核酸 LNP 制劑通常由脂質(zhì)和非脂質(zhì)賦形劑構成。兩種賦形劑類型在疫苗的穩(wěn)定性、轉(zhuǎn)染有效性和安全性中起到重要作用[2]。因此，評估LNP 制備中所用原輔料的化學組成和純度至關重要，因為它們直接影響最終產(chǎn)品質(zhì)量。強制性現(xiàn)行藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范原輔料鑒定測試或驗證結(jié)合簡化的檢測，可有效解決這一質(zhì)量控制需求。拉曼光譜現(xiàn)在是鑒定測試的標準技術。拉曼光譜可對原輔料進行現(xiàn)場身份驗證。SORS 是一種專門的技術，可以準確鑒定不透明或透明表面下方的材料，無需打開樣品瓶或容器[3]。在本應用簡報中，使用 Vaya 拉曼光譜系統(tǒng)(基于 SORS 的手持式拉曼光譜儀)分析 mRNA LNP 制備中所用的幾種市售脂質(zhì)和非脂質(zhì)賦形劑。Vaya 可以穿透透明和不透明容器鑒定原輔料。
 

　　結(jié)果與討論脂質(zhì)和非脂質(zhì)賦形劑的類型脂質(zhì)賦形劑和非脂質(zhì)賦形劑(如緩沖液組分和冷凍保護劑)用于基于核酸的 LNP 產(chǎn)品。圖 1 顯示了本研究中所用的四類化學品(脂質(zhì)、緩沖液、溶劑和糖基冷凍保護劑)及其相應的容器類型。脂質(zhì)脂質(zhì)為 LNPs 的結(jié)構單元。圖 2 顯示了拉曼光譜的疊加圖，以及 Vaya 如何輕松區(qū)分聚乙二醇化、離子和固醇類脂質(zhì)。拉曼譜帶歸屬確認脂質(zhì)中存在長烴鏈[4]。1440 cm-1 處的譜帶來自 CH2 和 CH3 的變形振動，而 1673 cm-1 處的譜帶來自存在的 C=C 的伸縮振動。在 DSPC 中，949 cm-1 處的譜帶對應于 PO 伸縮振動。1700 cm-1 處的譜帶來自 DSPC 和DMG-PEG 2000 脂質(zhì)中的 C=O 伸縮振動。
 

　　緩沖液在 LNP 制備期間使用了各種類型的緩沖液。圖 3 顯示了三種生物緩沖液類型的拉曼光譜疊加圖及相應歸屬?；谒腥庾V中顯示的不同拉曼譜帶，可以在 LNP 制備之前鑒定這些緩沖液。在 tris 光譜中，1500–1700 cm-1 區(qū)域的譜帶與 N-H彎曲相關。對于 HEPES，1046 cm-1 處的譜帶來自 SO3 伸縮振動。在檸檬酸中，1700 cm-1 處的譜帶來自 C=O 伸縮振動。
 

　　有機溶劑有機溶劑在 LNP 制備中起重要作用。圖 4 顯示了三種溶劑類型的拉曼光譜疊加圖及相應歸屬。這些溶劑的光譜顯示其譜帶存在明顯差異。甲醇在 1035 cm-1 處的強譜帶對應于 C-O 伸縮振動。乙醇光譜在 882 cm-1 處有一個強譜帶，對應于 C-C伸縮振動，在 1050 和 1096 cm-1 處有兩個小峰，分別對應于C-O 伸縮振動和 CH3 面內(nèi)搖擺振動。乙腈在 921 cm-1 處有一條強譜帶，表明為 C-C 骨架振動模式。
 

　　冷凍保護劑在配制步驟中使用冷凍保護劑延長 mRNA LNP 保質(zhì)期。各種糖的拉曼光譜及其相應的歸屬如圖 5 所示。疊加圖展示了如何用每種糖的光譜將其與其他糖區(qū)分開來。在蔗糖光譜中，641.42 和 849.57 cm-1 處的信號分別是扭轉(zhuǎn) CH2 和C-C 伸縮振動的結(jié)果。麥芽糖在 850.96 cm-1 處的信號與 CH變形振動相關。海藻糖在 841.25 cm-1(C-O-C 變形振動)、910.63 cm-1(C-O 伸縮振動)、1121.57 cm-1(C-C 伸縮振動)和 1454.82 cm-1(CH2 面外搖擺振動和 C-C 伸縮振動)處出現(xiàn)譜帶。分別在 878 和 1050 cm-1 處發(fā)現(xiàn)的同相 C-C-O 伸縮振動 (878 cm-1) 和異相 C-C-O 伸縮振動(1050 cm-1)。
 

　　結(jié)論本應用簡報已經(jīng)證明，Agilent Vaya 手持式拉曼光譜系統(tǒng)可用于分析和鑒定 mRNA LNP 制劑中所用的脂質(zhì)和非脂質(zhì)賦形劑。本文所用的技術可以直接測量不同容器(透明和棕色玻璃瓶以及聚乙烯材質(zhì))中的原輔料。借助 Vaya，生物藥物產(chǎn)品的原輔料鑒定測試將易于推行并可直接在倉庫的檢疫區(qū)域進行。使用 Vaya 時，無需再進行采樣、無需配備采樣間，也無需再打開一級或二級容器。